這兩天，經(jīng)歷了第一批“網(wǎng)格化”篩查的市民發(fā)現(xiàn)，有些小區(qū)已經(jīng)重新進(jìn)入“決賽圈”，有些延長(zhǎng)了管控時(shí)間。其中起到關(guān)鍵作用的，是一份份核酸報(bào)告。

　　對(duì)于市民來(lái)說(shuō)，核酸檢測(cè)看似只有兩步：登記采樣，等待數(shù)小時(shí)后在健康云App上查詢(xún)結(jié)果。事實(shí)上，這背后凝聚了基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室(PCR實(shí)驗(yàn)室)檢驗(yàn)人員的大量工作。

　　采樣后，標(biāo)本經(jīng)歷了怎樣的“奇幻漂流”之旅?記者近日走進(jìn)同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院南院檢驗(yàn)科PCR實(shí)驗(yàn)室，聽(tīng)吳文娟主任揭秘一份準(zhǔn)確的核酸報(bào)告是如何誕生的。

　　標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)簽收

　　環(huán)節(jié)：清點(diǎn)密封消毒

　　“醫(yī)生，我今天在你們醫(yī)院做的核酸什么時(shí)候有結(jié)果呀?還要多久呀?”

　　“醫(yī)生，我急需核酸報(bào)告，能加急幫我檢測(cè)一下嗎?”

　　這幾天，申城各醫(yī)療機(jī)構(gòu)的醫(yī)務(wù)人員總會(huì)接到這樣的問(wèn)詢(xún)電話。很多人想象，核酸采樣后，直接用機(jī)器檢測(cè)很快就能出結(jié)果了。但其實(shí)，自從采樣護(hù)士在你的鼻部或咽部“輕捻慢攏”后，還要經(jīng)過(guò)標(biāo)本簽收、核酸提取、核酸轉(zhuǎn)移、核酸擴(kuò)增、結(jié)果審核等步驟。

　　核酸檢測(cè)樣本采集后，采集人員會(huì)清點(diǎn)數(shù)目，并用密封袋包裝好，用消毒劑噴灑消毒，然后放進(jìn)標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)箱，由專(zhuān)人送到核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。檢測(cè)人員收到樣本后會(huì)先對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)箱消毒，并在開(kāi)啟后對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)箱內(nèi)壁和標(biāo)本采集密封袋二次消毒，隨后拆開(kāi)密封袋取出樣本。

　　“核酸的采集管上都有條碼信息，簽收人員要理清標(biāo)本來(lái)自哪一個(gè)社區(qū)或人群，是單采還是混采?！眳俏木瓯硎?，“另外，我們還會(huì)留意標(biāo)本上的時(shí)間，便于日后需要時(shí)回溯?！?/p>

　　賦予“身份證”

　　要點(diǎn)：識(shí)空管防溢灑進(jìn)負(fù)壓

　　之后，核酸標(biāo)本就將經(jīng)歷“奇幻漂流”的第二步——要有“身份證”啦!檢驗(yàn)人員則將這一步稱(chēng)為“標(biāo)本前處理”?！癙CR反應(yīng)是在96孔板上實(shí)現(xiàn)的，每一個(gè)孔位都該有自己獨(dú)一無(wú)二的身份。”吳文娟說(shuō)。

　　看似只是“前處理”，但防備之心可是一點(diǎn)兒也不能松。檢驗(yàn)人員要識(shí)別空管或溢灑情況的發(fā)生。尤其在大人群10:1混采時(shí)，小小的試管被拭子擠滿(mǎn)，一旦陽(yáng)性標(biāo)本出現(xiàn)了溢灑，一方面可能造成其他標(biāo)本結(jié)果的污染(假陽(yáng)性)，另一方面會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)室的生物安全產(chǎn)生威脅——這是PCR實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)人員同樣要穿成“大白”模樣的原因——醫(yī)用帽子、N95口罩、面屏、護(hù)目鏡、醫(yī)用防護(hù)服、隔離衣、一次性鞋套、兩層手套，有了這些“束縛”，才能給檢驗(yàn)人員創(chuàng)造最安全的環(huán)境。

　　此外，PCR實(shí)驗(yàn)室要求嚴(yán)格分區(qū)，最好是負(fù)壓實(shí)驗(yàn)室?？諝饬鲃?dòng)只會(huì)從外向內(nèi)，那么實(shí)驗(yàn)室里的污染就不會(huì)擴(kuò)散到外界，可以保證實(shí)驗(yàn)室外面的安全。

　　PCR加樣

　　目標(biāo)：“揪出”遺傳物質(zhì)

　　拿到“身份證”的核酸標(biāo)本并不能直接測(cè)試，而是要先提取核酸，對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增。因此，核酸標(biāo)本“奇幻漂流”的下一站，是PCR加樣區(qū)——簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，檢驗(yàn)人員要把病毒的遺傳物質(zhì)(核糖核酸)給“揪出來(lái)”。

　　檢驗(yàn)人員戴著雙層手套，在生物安全柜內(nèi)一管一管地?cái)Q開(kāi)螺旋蓋，手工吸取樣本，加入核酸提取板孔中，再擰上螺旋蓋將標(biāo)本放回原處。

　　“有多少份樣本就有多少次的重復(fù)操作?！眳俏木暾f(shuō)。那時(shí)，檢驗(yàn)人員與新冠病毒“擦肩而過(guò)”的距離可能只隔著兩層乳膠手套——也就是2毫米，但核酸檢測(cè)工作不允許他們害怕。

　　獲得核酸后，檢驗(yàn)人員用移液槍將核酸轉(zhuǎn)移至事先準(zhǔn)備好反應(yīng)液的反應(yīng)管里，制成反應(yīng)體系，讓它進(jìn)入“奇幻漂流”的下一站：擴(kuò)增分析區(qū)。

　　“不能出錯(cuò)，不能有遺漏，不能發(fā)生生物安全事故。可以說(shuō)檢驗(yàn)人員全身時(shí)刻處于高度緊張的狀態(tài)。就單說(shuō)‘加樣’，檢驗(yàn)人員要用極小的槍頭將每個(gè)提取好的核酸，大概是一滴水的四分之一加入到試劑中，每一步操作都必須十二分地謹(jǐn)慎?！眳俏木旮嬖V記者，“我們迫切希望能有開(kāi)蓋、加樣的儀器來(lái)‘解放’檢驗(yàn)人員，可現(xiàn)有的儀器在速度上并不能令人滿(mǎn)意，遇上大樣本篩查只能靠手工操作?！?/p>

　　核酸擴(kuò)增

　　關(guān)鍵：開(kāi)弓沒(méi)有回頭箭

　　經(jīng)歷了復(fù)雜費(fèi)時(shí)的前期制備過(guò)程，樣本終于來(lái)到了“奇幻漂流”的關(guān)鍵一站。樣本的采樣質(zhì)量如何、核酸提取的質(zhì)量如何、結(jié)果如何都將在此處見(jiàn)分曉。

　　這里不得不提一下曾斬獲諾貝爾獎(jiǎng)的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，這是上世紀(jì)80年代中期發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)體外核酸擴(kuò)增技術(shù)，它可以將目標(biāo)基因片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增百萬(wàn)倍至數(shù)億倍，成為當(dāng)今生命科學(xué)研究最為重要且廣泛使用的技術(shù)手段之一。

　　怎么理解擴(kuò)增?如果把標(biāo)本提取出來(lái)的核酸看作是一塊土地，新冠病毒是種子，如何知道土地里有沒(méi)有種子?簡(jiǎn)單的方法是，加點(diǎn)水和肥料(試劑)，讓種子一個(gè)變兩個(gè)、兩個(gè)變四個(gè)、四個(gè)變八個(gè)……“病毒是看不到的，而且微量標(biāo)本也不容易檢測(cè)到，所以要讓它變多，才方便檢測(cè)出來(lái)。”吳文娟解釋。

　　當(dāng)反應(yīng)管在機(jī)器上開(kāi)始檢驗(yàn)后，也就意味著“開(kāi)弓沒(méi)有回頭箭”——從采樣到核酸制備，任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問(wèn)題都可能導(dǎo)致返工重測(cè)，從而使報(bào)告時(shí)間加倍。

　　3月15日，國(guó)家衛(wèi)健委發(fā)布《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第九版)》。其中，《方案》將解除隔離管理和出院標(biāo)準(zhǔn)修改為“連續(xù)兩次新型冠狀病毒核酸檢測(cè)N基因和ORF基因CT值均≥35(熒光定量PCR方法，界限值為40，采樣時(shí)間至少間隔24小時(shí))”，這兒的“CT”是指擴(kuò)增的閾值?！昂?jiǎn)單來(lái)說(shuō)，CT值越低，說(shuō)明陽(yáng)性越強(qiáng)；CT值越高，說(shuō)明陽(yáng)性越弱?！?/p>

　　作為初篩實(shí)驗(yàn)室，只能向疾控中心報(bào)告“疑似陽(yáng)性”。“我們會(huì)將CT值登記報(bào)告，上報(bào)相應(yīng)區(qū)域的疾控部門(mén)。隨后根據(jù)疾控的要求轉(zhuǎn)運(yùn)原管標(biāo)本以供復(fù)核?！眳俏木暾f(shuō)，PCR實(shí)驗(yàn)室也會(huì)通過(guò)紫外線消毒。據(jù)介紹，通常陰性標(biāo)本會(huì)儲(chǔ)存一兩天以備查驗(yàn)。

　　結(jié)果審核

　　標(biāo)準(zhǔn)：確保無(wú)誤報(bào)結(jié)果

　　走到這，核酸標(biāo)本的“奇幻漂流”之旅并沒(méi)有結(jié)束。檢測(cè)人員需要對(duì)擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行分析：包括同批隨樣本檢測(cè)的陰陽(yáng)性質(zhì)控結(jié)果是否在控、基線設(shè)置、逐孔分析內(nèi)標(biāo)及樣本結(jié)果是否正常等。當(dāng)陰陽(yáng)性質(zhì)控全部符合檢測(cè)要求，排除假陰性、假陽(yáng)性可能，對(duì)異常結(jié)果樣本及時(shí)進(jìn)行復(fù)核，確保無(wú)誤后才能最終報(bào)告結(jié)果，并上傳到健康云。

　　有人好奇，健康云核酸結(jié)果查詢(xún)里，“OFR1a/b陰性，N基因陰性”是什么意思?吳文娟解釋?zhuān)@是新型冠狀病毒核酸的兩個(gè)特異性片段，“一般同一份標(biāo)本中兩個(gè)基因檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，會(huì)判斷為陽(yáng)性，單基因陽(yáng)性則需復(fù)檢?！?/p>

　　“現(xiàn)在我們檢驗(yàn)科的工作包括了‘愿檢盡檢’——市民需要核酸陰性報(bào)告這張‘通行證’的；‘應(yīng)檢盡檢’——住院患者和陪護(hù)，還有醫(yī)院承擔(dān)的密接、次密接及高風(fēng)險(xiǎn)人群的核酸檢測(cè)。這幾天，還有‘網(wǎng)格化’篩查的任務(wù)?！眳俏木甑恼Z(yǔ)氣里透露著疲憊。

　　儀器運(yùn)行時(shí)，檢測(cè)人員也不能輕松一會(huì)兒，此時(shí)，新的一批標(biāo)本又來(lái)了。吳文娟說(shuō)，檢驗(yàn)人員一直在超負(fù)荷運(yùn)轉(zhuǎn)?！胺雷o(hù)服是不透氣的，全身罩在里面，剛穿上就會(huì)很熱。加之機(jī)器一刻不停，熱量積聚一天后整個(gè)實(shí)驗(yàn)室會(huì)非常悶熱，即使開(kāi)著空調(diào)，室內(nèi)溫度也會(huì)達(dá)到28℃-30℃。此外，實(shí)驗(yàn)室里靜電也很強(qiáng)烈，因此也特別干燥?！彼f(shuō)，“我們中的很多人已經(jīng)連續(xù)幾天都沒(méi)有回過(guò)家了，大家都是‘5+2’‘白+黑’的節(jié)奏在工作，能夠躺下來(lái)休息一會(huì)，就覺(jué)得很滿(mǎn)足了?！?/p>